ИЗГОТОВЛЕНИЕ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПО ПРОСТЕЙШИМ


ИЗГОТОВЛЕНИЕ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПО ПРОСТЕЙШИМ

Изготовление микроскопических препаратов представляет трудную задачу, в которой на первых порах неизбежны ошибки и неудачи. Однако наличие хотя бы маленькой коллекции препаратов на канадском бальзаме значительно дополнит демонстрационную часть на живых объектах. Кроме того, эта работа может быть полезной для кружковых занятий, так как здесь приобретаются навыки к аккуратной и тонкой технике микроскопиро-вания.

Заранее приготовляют следующее:

1) Цилиндрические плоскодонные стаканчики с пробками (высота 30 мм, диаметр 20 мм), в которые наливают на /3: а) раствор иода на 70°-ном спирту цвета крепкого чая — 1 стаканчик; б) 70°-ный спирт -2 стаканчика; в) 96°-ный спирт — 1 стаканчик; г) дестиллированную воду — 1 стаканчик; д) раствор краски ге-малаун или кармин (приготовление см. ниже, раздел П1, «Оборудование», 23) — 1 стаканчик; е) /2 объёма 96°-ного спирта-)- /2 объёма бергамотового масла — 1 стаканчик; ж) бергамотовое масло — 1 стаканчик; з) ксилол или толуол — 1 стаканчик;

2) часовые стёкла — 5—10 шт.;

3) канадский бальзам;

4) предметные и покровные стёкла, тщательно протёртые мягкой тряпочкой;

5) сулему-спирт (жидкость Шаудинна) (приготовление см. ниже, раздел III «Оборудование», 13);

6) фильтровальную бумагу, пинцет, мягкую белую тряпочку или полотенце;

7) несколько тонко оттянутых пипеток (см. ниже, раздел III, 4). Лучше всего для каждого реактива завести свою пипетку. Обязательно должна быть отдельная пипетка для живого материала;

8) богато населенную сырую культуру простейших из природного водоёма или пробирку с парамециями (и другими инфузориями).

Первый способ. Осторожно кладут покровные стёкла размером 18 х 18 мм на поверхность культуры. При этом различные инфузории, жгутиковые и амёбы накапливаются снизу на стекле. Через 10—15 мин. стекло вынимают пинцетом или пальцами, быстро поворачивают и кладут «лицом» вверх на предметное стекло, предварительно смоченное маленькой капелькой воды. Просматривают при малом увеличении или под лупой и, если замечают каких-либо простейших, приступают к фиксации.

Для этого в часовое стекло наливают подогретой (около 40°) жидкости Шаудинна, куда «лицом» вниз плашмя с небольшой

высоты бросают стёкла с простейшими. При атом многие инфузории и амёбы приклеиваются к стеклу. Через 1—2 мин. стёкла вынимают из фиксатора и помещают стоймя в стаканчик с раствором иода на 2-3 мин. Далее - в 70°-ный спирт (15-20 мин.), затем — в дестиллированную воду (1 мин.) и, наконец, в краску. В гемалауне держат 4—5 мин., в кармине 10—25 мин. Здесь нельзя указать точное время, так как оно зависит от концентрации краски и особенностей объекта. Поэтому лучше всего процесс окраски контролировать под микроскопом. Для этого стекло с объектами время от времени вынимают из краски, кладут «лицом» вверх на предметное стекло и просматривают при малом увеличении. Как только замечают, что ядро более или менее ясно отличается от протоплазмы, производят дальнейшую обработку. Если же ядро совсем не выделяется и препарат светлый, то снова кладут в краппу. Наконец, если препарат сплошь закрашен краской так, что ядро тоже не выделяется, то краску ослабляют, прибавляя под микроскопом каплю подкисленного спирта1 2. Как только контуры ядра начнут выступать, препарат быстро переносят в воду.

Итак, после окраски препарат ополаскивают водой и проводят последовательно через стаканчики, содержащие 70°-спирт, 96°-ный спирт, смесь 96°-ного спирта с бергамотовым маслом, чистое бергамотовое масло и ксилол. В каждом из этих реактивов препарат держат не менее 5 мин.

При переносе препарата из стаканчика в стаканчик необходимо помнить, на какой стороне «лицом» находится объект. Лучше всего условиться, чтобы объект в стаканчике всегда находился, скажем, на той поверхности покровного стекла, которая обращена вправо от работающего. Стекло вынимают из стаканчика пинцетом и каждый раз прикладывают ребром к фильтровальной бумаге, чтобы возможно больше удалить остаток предыдущего реактива (не высушить препарата, не дышать на него, держать его на воздухе вне реактива возможно короткое время).

Из ксилола препарат заключают в канадский бальзам. Для этого на середину чисто вытертого (абсолютно сухого) предметного стекла помещают маленькую каплю канадского бальзама. Если он слишком густ, то разбавляют небольшим количеством ксилола настолько, чтобы консистенция бальзама была полужидкой.

Вынутое из ксилола покровное стекло с объектом накладывают (под некоторым углом) на каплю. При этом надо стараться не

Удобно пользоваться спичкой, передвигая ею покровное отекло к краю часового. Из-за вогнутости последнего объекты не стираются.

Подкисленный спирт приготовляют, прибавляя к 10 куб. см 70°-ного спирта 1—2 капли соляной или уксусной кислоты.

дышать на стекло с ксилолом, так как при малейшей влажности ксилол мутнеет и поэтому препарат гибнет. Выступивший из-под покровного стекла избыток бальзама удаляют прикладыванием сухой тряпочки.

Препарат несколько дней держат в горизонтальном положении до полного затвердения бальзама. На предметном стекле делают надпись (тушью) с указанием объекта, способа фиксации, окраски и даты. Например: туфелька (Paramecium caudatum). Ядро. Жидкость Шаудинна. Гемалаун, 3. 11. 47. Кроме тоге, и самый объект можно обвести маленьким кружком туши (не раздавить объекта!). Это удобно для отыскания объекта под микроскопом.

Для изготовления препаратов паразитических инфузорий, амёб и грегаркн поступают следующим образом.

Пинцетом берут кусочек вскрытого зараженного кишечника и прикладывают к чистым (промытым спиртом и водой и вытертым насухо) покровным стеклам, слегка размазывая по стеклу. При этом, конечно, часть паразитических простейших окажется на стекле. Приготовленный таким образом мазок плашмя бросают «лицом» вниз в горячий фиксатор (жидкость Шаудинна), а затем проводят через остальные реактивы и окрашивают так, как это указано выше.

Второй способ. 3—5 капель с большим количеством инфузорий помещают в часовое стекло, куда затем приливают втрое большее количество подогретой до 40 жидкости Шаудинна. Через 1—2 мин. зафиксированных инфузорий вылавливают тонкой пипеткой и поочередно переносят в часовые стекла с раствором иода и других жидкостей, указанных при предыдущем способе и соблюдая то же время. Вся процедура производится под препаровальной лупой. Здесь все старания должны быть приложены к тому, чтобы, при переносе захватывалось возможно меньшее количество реактива. Не надо при этом дышать на стекла с бергамотовым маслом и ксилолом, иначе объекты замутнеют.

Из ксилола инфузорий вылавливают маленькими группами, помещают в каплю с бальзамом и накрывают покровным стеклом.

Итак, последовательность обработки препарата при обоих способах следующая:

1. Фиксация объекта. Жидкость Шаудинна — 1—2 мин.

2. Удаление из объекта фиксатора. Раствор иода на 70°-ном спирту — 2 мин.

3. Удаление из объекта иода. 70°-ный спирт — 15 мин.

4. Удаление спирта. Вода — 1 мин.

5. Окрашивание. Краска — 5—25 мин.

6. Промывание объекта. Вода — 5 мин.

7. Обезвоживание объекта. 70°-ный и 96°-ный спирты, смесь 96°-ного спирта с бергамотовым маслом, чистое берРамото-

вое масло, ксилол; в каждом из названных реактивов по 5 мин.

8. Заключение объекта. Канадский бальзам.

9. Этикетирование объекта. Надпись на препарате.

Рис. 46. Вверху (из Гартманна и Павловского) - парамеция (.4), стадия её деления (Б) и конъюгации (В), при большом увеличении (с окрашенных препаратов на канадском бальзаме).

Внизу (оригинал) - последовательные стадии деления парамеции, при малом увеличении (с препаратов, окрашенных кармином).

Удачные препараты парамеций и других простейших будут служить прекрасной демонстрацией принципа одноклеточности (протоплазма, ядро). Кроме того, можно приготовить препараты конъюгирующих и делящихся инфузорий и на последних проследить отдельные стадии деления ядра и протоплазмы (рис. 46).



Ухо, Ф.Н. Красиков, 1928



фильм Блондинка за углом смотреть онлайн
фильм Маленькая Вера смотреть онлайн
фильм Любовь и голуби смотреть онлайн